۳-۸
Total pigments = chlorophyll a + chlorophyll b + carotenoids ۹-۳
در این فرمول ها Chla، Chlb، ChlT ،Carبه ترتیب غلظت کلروفیل a، کلروفیل b، کلروفیل کل وکاروتنوئید می‌باشد. غلظت بر حسب mg. ml^-1 عصاره گیاهی تعیین گردید. نتایج حاصل از اندازه‌گیری مقدار رنگیزه‌های فتوسنتزی بر حسب گرم وزن تر محاسبه و ارائه گردیدند.
۳-۶-۱-۲- سنجش میزان آنتوسیانین‌ها
از روش (۱۹۷۹)Wagnerجهت اندازه‌گیری مقدار آنتوسیانین‌های برگ وریشه استفاده شد. ۱/۰ گرم از بافت برگی یا ریشه را در‌ها‌ون چینی با ۱۰ میلی‌لیتر متانول اسیدی (متانول خالص واسید کلریدریک خالص به نسبت حجمی‌۱:۹۹) کاملا سائیده وعصاره در لوله‌ها‌ی آزمایش سر پیچ دار ریخته شد و به‌مدت ۲۴ ساعت در تاریکی و دمای ۲۵درجه سانتی‌گراد قرار گرفت. سپس به‌مدت ۱۰دقیقه با سرعت ۴۰۰۰دور در دقیقه سانتریفیوژ و جذب محلول بالایی در طول موج ۵۵۰ نانومتر اندازه‌گیری شد. برای محاسبه غلظت ضریب خاموشی (ε) ۳۳۰۰۰سانتیمتر بر مول در نظر گرفته شد.( Wagner, G. J. 1979 )

رابطه۳-۱۰
A=جذب b= عرض کوت c= غلظت محلول مورد نظر
۳-۶-۱-۳- اندازه‌گیری مقدار پرولین
۳-۶-۱-۳-۱- تهیه معرف
۲۵/۱گرم اسید نین هیدرین را به ۳۰ میلی‌لیتر اسید استیک اضافه کرده و محلول حاصل را گرم کرده تا نین هیدرین در اسید حل شود. سپس ۲۰میلی‌لیتر اسید فسفریک ۶ مولار به محلول اضافه گردید. محلول به دست آمده به‌مدت ۲۴ ساعت در یخچال با ۴سانتی‌گراد قرار داده شد تا معرف به خوبی تثبیت گردد.
۳-۶-۱-۳-۲- روش اندازه‌گیری پرولین
۰۲/۰گرم از بافت تازه را در ده میلی‌لیتر محلول سه درصد اسید سولفوسالیسیلیک ساییده و مخلوط یکنواختی تهیه گردید. عصاره حاصل با استفاده‌ از سانتریفیوژ به‌مدت ۵دقیقه درg ۱۰۰۰۰ سانتریفیوژ شد. سپس دو میلی‌لیتر از مایع رویی را با دو میلی‌گرم معرف نین هیدرین و دو میلی‌لیتر اسید استیک خالص مخلوط کرده و یک ساعت در دمای ۱۰۰ درجه سانتی‌گراد حمام آب گرم، قرار گرفت. بعد از این مدت، جهت قطع انجام کلیه واکنش‌ها‌، لوله‌ها‌ی محتوی مخلوط در حمام یخ، سرد گردید، سپس چهار میلی‌لیتر تولوئن به مخلوط اضافه گردید و لوله‌ها به خوبی تکان داده شد. با ثابت نگه داشتن لوله‌ها به‌مدت ۱۵-۲۰ دقیقه، دو لایه کاملا مجزا در آنها‌ تشکیل شد. از لایه رنگی فوقانی که حاوی تولوئن و پرولین بود، برای اندازه‌گیری غلظت پرولین استفاده گردید. جذب مقدار مشخصی از این ماده رنگی در طول موج ۵۲۰ نانومتر تعیین شد و مقدار پرولین در هر نمونه با استفاده‌از منحنی استاندارد، تعیین گردید. نتایج حاصل از اندازه‌گیری مقدار پرولین بر حسب گرم وزن تر محاسبه وارائه گردید. ( ۱۹۷۳ et al., Bates)
۳-۶-۱-۳-۳- منحنی استاندارد
با استفاده ‌از محلول۵۰۰ میکرومول بر لیتر پرولین خالص رسم گردید. محلول‌ها‌یی با غلظت ۱۰، ۲۰، ۴۰، ۶۰، ۸۰و ۱۲۰میکرومول بر لیتر تهیه نموده و مطابق آن چه در مورد عصاره گفته شد، عمل کرده و منحنی جذب آنها ‌بر حسب غلظت رسم گردید.
رابطه۳-۱۱ ۰۰۷۵/۰-X ۰۰۲۹/۰Y=
در این رابطه Y برابر جذب خوانده شده و X برابر غلظت پرولین بر حسب میلی‌مول بر لیتر است.
۳-۷- تجزیه تحلیل آماری
تجزیه و تحلیل‌های آماری در این مطالعه طبق طرح کاملا تصادفی با سه تکرار در نظر گرفته شد. مقایسه میانگین‌ها با استفاده ‌از نرم افزار SPSS انجام گرفت (α£۰٫ ۰۵). برای رسم نمودارها ‌نیز از نرم افزار Excel استفاده شد. همچنین نمودار ۳-۱ منحنی‌های استاندارد مورد استفاده در این آزمایش را نشان می‌دهد.

نمودار(۳-۱) منحنی استاندارد پرولین
فصل چهارم
نتایج
فصل چهارم
۴ - نتایج
۴-۱- اثر تیمارهای مختلف بر روی پارامترهای مختلف جوانه‌زنی بذر شیرین بیان
۴-۱-۱- اثر تیمارهای امواج میکروویو بر درصد جوانه زنی
به منظور بررسی نقش امواج میکروویو بر جوانه‌زنی بذر شیرین بیان ،دو سطح قدرت از این امواج آزمایش گردید. . نتایج آنالیز واریانس حاصل از داده‌ها در جدول (۴-۱) نشان داده شده است.
تیمار با امواج میکروویو درصد جوانه‌زنی را در بیشتر بازه های زمانی نسبت به شاهد به طور معنی داری افزایش داد که بیشترین اثر را بترتیب تیمارهای۶۰و۳۰ ثانیه با قدرت ۱۰۰ وات وکمترین اثر تیمار ۳۰ ثانیه باقدرت ۵۰۰ وات در بین بازه های زمانی نشان داد.
با افزایش مدت زمان تیمارهای میکروویواز۳۰ ثانیه تا ۶۰ثانیه درصد جوانه زنی رو به افزایش بود ولی در تیمار مدت زمان ۹۰ ثانیه درصد جوانه زنی نسبت به تیمار ۶۰ ثانیه کاهش یافت.
کمترین مقدار جوانه زنی مربوط به تیمار ۹۰ ثانیه با قدرت ۵۰۰ وات بود که به طور معنی داری نسبت به سایر تیمارها کاهش نشان داد ونسبت به شاهد در سطح ۵ درصد معنی دار نشد (نمودار ۴-۱).
جدول (۴-۱)تجزیه واریانس اثر امواج مایکروویو بر درصدجوانه زنی بذور شیرین بیان.