شکل ۲-۱ جداسازی شریان و ورید کلیه جهت کلامپ کردن شریان
۲-۵- پروتکل آزمایش
حیوانات جهت ریکاوری و برطرف شدن عوارض ناشی از جراحی به قفس بازگردانده شده و آب و غذا در اختیارشان قرار می­گرفت. پس از گذشت ۲۴ ساعت ری­پرفیوژن در گروه ­های کنترل و بربرین یا معادل ری­پرفیوژن در گروهSham ، حیوانات با اتر بیهوش ­گردیدند و نمونه­های خون از بطن قلبشان با بهره گرفتن از سرنگ سرد هپارینه گرفته می­شد و سریعاً پلاسمای آن­ها توسط دستگاه سانتریفیوژ جدا و در c ͦ۲۰- نگهداری می­شد.
۲-۶ - اندازه ­گیری غلظت­های کراتینین و اوره پلاسما
غلظت کراتینین پلاسما [Cr]p و نیتروژن اوره پلاسما [ UN]p برای بررسی عملکرد کلیه توسط دستگاه اتوآنالایزر ( بیمارستان نمازی) اندازه ­گیری شدند. غلظت کراتینین پلاسما (_P[Cr]) بر اساس واکنش آن با پیکرات قلیایی^[۱۴] با روش ژافه^[۱۵] (اندازه گیری مستقیم) تعیین می­شد و واحد آن بر حسب میلی­گرم بر دسی­لیتر (mg/dl) بود. غلظت نیتروژن اوره پلاسما (_P[UN]) بر اساس واکنش آن با دی استیل منوکسیم^[۱۶] با روش اندازه ­گیری مستقیم تعیین گردیده است و واحد آن بر حسب میلی­گرم بر دسی­لیتر (mg/dl) بود.

۲-۷- اندازه ­گیری غلظت هورمون­های جنسی و بررسی هیستوپاتولوژی بیضه
به علاوه، سطح تستوسترون برای بررسی عملکرد بیضه­ها و نیز سطح هورمون­های LHو FSH به روش رادیوایمنواسی (RIA)، اندازه ­گیری شدند. همچنین بافت بیضه حیوانات جهت مطالعات بافت شناسی جدا شدند. نمونه­های بافتی جهت تثبیت ابتدا به مدت ۴ ساعت در محلول بوئن نگهداری و سپس به فرمالین %۱۰ منتقل شدند و در انتها حیوانات با گرفتن حجم زیاد و سریع خون معدوم ­گردیدند.
۲-۸- روش آماده سازی جهت رنگ­آمیزی با هماتوکسیلین-ائوزین

1. 1. نمونه­های بافتی جهت تثبیت ابتدا به مدت ۴ ساعت در محلول بوئن نگهداری و سپس به فرمالین %۱۰ منتقل شدند.

1. 1. مرحله آبگیری: قرار دادن قطعات بافتی بطور متوالی در درجات صعودی الکل.

1. 1. مرحله پاکسازی: قرار دادن نمونه­ها در گزیلن جهت شفاف شدن بافت­ها.

1. 1. مرحله قالب­گیری: قرار دادن قطعات بافتی در قالب­های محتوی پارافین ذوب شده.

1. 1. مرحله برش گیری: تهیه برش­های نازک به ضخامت ۵ میکرومتر توسط دستگاه میکروتوم

1. 1. مرحله رنگ­آمیزی: پس از قرار دادن برش­های بافتی بر روی لام شیشه ­ای، نمونه­ها با بهره گرفتن از رنگ­آمیزی هماتوکسیلین- ائوزین رنگ­آمیزی شدند.

۲-۹- روش های آماری
مقادیر غلظت­های پلاسمایی به صورت میانگین ± خطای معیار (Mean SEM) ارائه و تمام تجزیه و تحلیل­های آماری با روش آنالیز واریانس یک طرفه و به دنبال آن تست دانکن و استفاده از نرم افزار آماری version16 SPSS و با در نظر گرفتن سطح معنی داری ۰۵/۰ p< انجام شدند.
فصل سوم
نتایج
۳-۱- مقایسه یافته­های پلاسمایی
بررسی نتایج پلاسمایی تغییرات فاکتورهای زیر را در گروه ­های مختلف نشان می­دهد:
۳-۱-۱- کراتینین پلاسما (بر حسب میلی­گرم در دسی­لیتر)
مقایسه میانگین غلظت کراتینین پلاسما بین گروه ­های آزمایشی( نمودار۱) نشان داد که سطح کراتینین پلاسما در گروهI/R نسبت به مقادیر آن در گروه ­های Sham و Sham+BBR که با هم برابر بودند، بالاتر بود. (۰۰۱/۰p<) در مقابل، در گروه I/R+BBR سطح کراتینین پلاسما نسبت به مقادیر آن در گروه I/R کاهش یافت در حالی که نسبت به گروه ­های Sham و Sham+BBR بیشتر بود.( ۰۰۱/۰>p).
جدول ۳-۱ مقادیر کراتینین پلاسما در گروه ­های مختلف

مقادیر کراتینین پلاسما به صورت میانگین ± خطای معیار و بر حسب میلی­گرم در دسی­لیتر در انتهای دوره ۲۴ ساعته ری­پرفیوژن در گروه درمان نشده (I/R) و گروه ­های دریافت کننده بربرین به صورت تزریق داخل معدی طی ۷ روز قبل از جراحی به میزان ۱۵ میلی­گرم بر کیلوگرم وزن بدن در هر روز در گروه ­های I/R+BBR وSham+BBR . در گروه هایSham و Sham+BBR شریان­های کلیه مسدود نشده اند.