۱-۱۴-۲-۱ موقعیت جغرافیایی
استان یزد در مرکز ایران در قلمرو سلسله جبال مرکزی ایران بین عرض های جغرافیایی ۲۹ درجه و ۴۸ دقیقه تا ۳۳ درجه و ۳۰ دقیقه شمالی و طول جغرافیایی ۵۲ درجه و ۴۵ دقیقه تا ۵۶ درجه و ۳۰ دقیقه شرقی از نصف النهار مبدا قرار گرفته است. استان یزد از سرزمینهای تاریخی است که در میان ایالت های قدیمی و بزرگ پارس، اصفهان، کرمان و خراسان قرار داشتهاست(۴۵).
شکل ۱-۱۰ موقعیت جغرافیائی استان یزد(۴۵).
۱-۱۵ هدف از تحقیق:
آنچه که باعث استفاده از مارکرهای STR در جمعیت شناسی شده است، این واقعیت است که درجه فراوانی آللی هر مارکر STR در هر جمعیت منحصر به فرد است. در حقیقت طبق مطالعات انجام شده فراوانی آللهای STR در نژادهای مختلف و حتی در مناطق جغرافیایی خاص، تفاوتهایی را نشان داده است. بنابراین بررسی هر یک از لوکوس های STR در هر نژاد یا جمعیت خاص برای تفسیر صحت نتایج حاصل از انجام آزمایش های تعین الگوی ژنتیکی به کمکSTR و انجام محاسبات آماری مربوطه امری ضروری است. برای بهره گیری از فواید این فناوری نوپا در زمینهی تشخیص افراد، ضروری است تا فراوانی آللی لوکوسهایSTR مختلف در جمعیت بومی کشور مورد بررسی قرار گیرند (۴۵).
مطالعات گذشته روی جمعیت های ایرانی، حضور تعدادی از آللها را با پلی مورفیسم بالا نشان میدهد(۳۷-۴۶٫)
هدف از این مطالعه به دست آوردن پارامترهای جمعیتی بر اساس فراوانی آللی به دست آمده از شانزده جایگاه STR، در جمعیتهای کرمانشاه و یزد به منظور بررسی تفاوت ژنتیکی میان این دو جمعیت و سایر جمعیتها میباشد.
فصل دوم
۲-۱ نمونهگیری
برای نمونهگیری از اقوام کرد و یزد از نمونه هایی که به آزمایشگاه ژنتیک پزشکی تهران رجوع میکردند، استفاده شد. پس ازکسب رضایت نامه ۴ میلی لیتر خون محیطی از افراد غیر خویشاوند بر اساس محل تولد و اطلاعات مربوط به سه نسل گذشته (پدری و مادری) تهیه شد و در لولههای حاوی ماده ضد انعقاد (EDTA) ریخته شد برای تکمیل نمونههای یزدی از همکاری آزمایشگاهی در یزد استفاده گردید و برای نمونههای کرد به استان کرمانشاه رفته و از آزمایشگاه بیمارستان طالقانی نمونهگیری به عمل آمد.
۲-۲ استخراج DNA به روش نمک اشباع
استخراج DNA با بهره گرفتن از روش استاندارد نمک اشباع طبق مراحل زیر انجام شد:
۱- ۳ میلی لیتر از نمونهی خون محیطی حاوی مادهی ضد انعقاد EDTA، داخل فالکون ۱۵ میلی لیتری ریخته شد و با بهره گرفتن از آب مقطر سرد به حجم ۱۰ میلی لیتر رسانده شد. سپس فالکون به شدت حرکت داده شد این کار جهت لیز بهتر گلبولهای قرمز از طریق فرایند تورژسانس میباشد. سپس نمونه را در دستگاه EBA 20 Hettich zentrifugen به مدت ۱۰ دقیقه با دور ۵۰۰۰ سانتریفیوژ شد و محلول رویی خارج گردید و رسوب انتهایی فالکون نگه داشته شد.
۲- با افزودن آب مقطر سرد به رسوب، حجم آن به ۱۰ میلی لیتر رسانده شد و مجدداً با همان شرایط ذکر شده آن را سانتریفیوژ گردید و رسوب حاصل که حاوی گلبولهای سفید است نگه داشته شد.
۳- پس از افزودن ml10 محلول I استخراج DNA به رسوب، حجم آن به ۱۰ میلی لیتر رسانده شد. سپس در شرایط ذکر شده آن را سانتریفوژ کرده و محلول رویی آن دور ریخته شد.
جدول۲-۱ محلولI استخراج DNA (محلول لیز کننده گلبولهای قرمز)
غلظت | مواد |
۱۰ mM | Tris-Hcl: pH:7.5 |
۰٫۳۲ mM | Sacarose |
۵ mM | MgCl2 |
%۱ | Triton X-100 |
۴-۵/۱ میلی لیتر از محلول II استخراج DNA(از قبل تهیه شده به شرح زیر)، lμ ۲۵ سدیم دو دسیل سولفات SDS و lμ ۲۰ پروتئیناز K به رسوب سفید رنگ انتهای فالکون افزوده شد.
جدول ۲-۲ محلول II استخراج DNA (محلول لیز کننده گلبولهای سفید)
غلظت | مواد |